TELEFONO

+86 (027) 5111 3188

categoria di prodotto

Condividi su:

T4 DNA Ligase 5 U / μl per Connessione DNA Molecolare Biologia Reagente

Specifica: 500U.
  • G3340-100.
  • Servicebio
  • Servicebio.

Descrizione del prodotto

G3340-100.

Introduzione:

T4 DNA Ligase può catalizzare il legame di DNA o RNA a doppio blocco appiccicoso o contorto tra l'estremità 5'-P e la fine del 3'-oh con un legame di fosfodiestere. Allo stesso tempo, l'enzima può anche riparare Nicks a Stranded in catene DNA, RNA e DNA / RNA a doppia fila.

Definizione dell'attività: un'unità di enzima può catalizzare 1 Nmol di pirofosfato con etichettato da 32P in ATP attraverso la reazione di spostamento entro 20 minuti a 37 ° C (un'unità è uguale a circa 200 unità di allegatura appiccicosa).

T4 DNA Ligase. BUFFER DI STOCCAGGIO:20 mm Tris-HCl (pH 7,5), 50 mm KCL, 1 mm DTT, GLYCerolo del 50% (V / V).

5 × T4 DNA Ligase Buffer:250 mm Tris-HCl (pH 7.6), 50 mm MGCL2, ATP da 5 mm, DTT da 5 mm, Enhancer.

Stoccaggio e trasporto

Trasporto con ghiaccio bagnato; Stoccaggio a -20 ° C, valido per 12 mesi.

Numero di componenti

Componente

G3340-50.

G3340-100.

G3340-1.

T4 DNA Ligase.

250 u (50 μl)

500 u (100 μl)

G3340-2.

5 × T4 DNA Ligase Buffer

1 ml

2 × 1 ml

Manuale d'uso

1

Condizioni di reazione legale

La reazione di legatura a 25 ° C per estremità adesive richiede 5-30 minuti; La reazione di legatura a 25 ° C per le estremità smussate non supera le 2 ore o la reazione a 4 ° C durante la notte.

Conversione di prodotti di legazione

1. Estrarre celle competenti (come E.Coli DH5α, E.Coli Top10, ecc.) Dal frigorifero -80 ℃ e metterli su ghiaccio per scongelare;

2. Aggiungere il campione reagito allo stato competente, muovere delicatamente il fondo del tubo con le dita da mescolare e il bagno in ghiaccio per 30 minuti;

3. Quindi posizionare il prodotto in un bagno d'acqua a 42 ℃ per riscaldare lo shock per 90 s. Dopo che è finita, metterlo su ghiaccio rapidamente per 2-5 minuti in un bagno di ghiaccio;

4. Prendere 900 μl di SOC o LB sterile e aggiungerlo al tubo EP. Dopo la miscelazione, posizionare il tubo EP su uno shaker e incubarsi a 220 giri / min a 37 ° C per 1 ora per rianimare i batteri (può anche essere collocato in un incubatore di 37 ° C. Posizionare la cultura per 1 ora);

5. Secondo i requisiti sperimentali, attirare diversi volumi di cellule competenti trasformate e aggiungile al terreno solido LB contenente i corrispondenti antibiotici, diffondere le cellule in modo uniforme, e dopo il liquido è completamente assorbito, posizionare la piastra capovolta nel 37 ° C incubatore e coltivare durante la notte.

Identificazione di cloni positivi

Le colonie monoclonali coltivate sul piatto vengono raccolte per l'identificazione del PCR della colonia, o dopo la coltura, il plasmide viene estratto dalla digestione della restrizione o dall'identificazione PCR, o il plasmide estratto è direttamente sequenziato e analizzato per l'identificazione.

Precauzioni

1. Si consiglia di configurare il sistema di reazione sul ghiaccio.

2. Quando la concentrazione del vettore e il frammento bersaglio è basso, non è necessario aggiungere acqua e usarlo direttamente per il trucco.

3. Si raccomanda che il rapporto molare del DNA vettoriale da inserire il frammento del DNA sia 1: 3 ~ 1: 10.

4. Una piccola quantità di precipitazioni nel buffer Ligase DNA 5 × T4 è normale. Può essere dissolto a 37 ° C prima dell'esperimento, e verrà utilizzato dopo la miscelazione accuratamente. Non ha alcun effetto sull'esperimento; Si consiglia di dissolversi in aliquoti e congelare per l'uso.

5. T4 DNA Ligase si raccomanda di essere prelevata quando viene utilizzato e ritornato a -20 ℃ immediatamente dopo l'uso.

6. Quando l'elettroporazione viene utilizzata per la trasformazione, il prodotto di organizzazione deve essere purificato per metodo di colonna o metodo di precipitazione di etanolo.

7. Quando si collega il vettore Blunt-Ended al frammento del DNA, il vettore deve essere defosforilato (è raccomandato G3400) per impedire la sua auto-circolamento.

8. Si prega di indossare il camice da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

G3340-1004.G3340-100O.

downloadimimg.Fetta 10.Fetta 13.Fetta 12.Fetta 14.

Contact us

Link veloci

categoria di prodotto

Entrare in contatto

 5 ° piano, 22 costruzione, biopark, Gaoxin 2nd Road No. 388, zona di sviluppo high-tech del lago orientale, Wuhan, Hubei, Cina 430079
 +86 (027) 5111 3188
Copyright © 2021 Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.