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Reagente di trasfezione Pei 40K per il reagente di trasfezione della biologia cellulare

Specifica: 10ml.
  • G1802-10ml.
  • Servicebio
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Descrizione del prodotto

G1802-10ml.

Introduzione:
Il reagente di transfezione PEI 40K (reagente di trasfezione in polietileniminale linearizzato) è un polimero cationico ad alta carica avente una polietilenimina lineare come corpo principale con un peso molecolare di 40000, che cinghie accusava positivamente, e può essere efficacemente combinata con l'acido nucleico negativo, forma a complesso, ed è introdotto nella cella. Il reagente in polietilene linearizzato IMINE (PEI 40K) è un basso reattivo tossico, ad alta efficienza di trasfezione e basso costo, è un reagente di trasfezione istantaneo cella molto popolare. Il reagente Transfection Attualmente provato Linear PEI 40K è ampiamente utilizzato in una varietà di linee cellulari tra cui Hek-293, HEK293T, Cho-K1, COS-1, CO-7, NIH / 3T3, SF9, HEPG2 e celle hela, ecc., Efficienza di trasfezione fino all'80% ~ 90%.

Stoccaggio e trasporto

Trasporto di sacchetto di ghiaccio (ghiaccio bagnato); 4 ° C Conservazione, valida per 6 mesi.

Passi

1. Preparati prima della trasfezione delle celle aderenti (6-Ben piatti come esempio, fare riferimento alla tabella allegata per altre specifiche):

a) il giorno prima della trasfezione, piantare le cellule uniformemente nella piastra del pozzo ad una densità appropriata, ed è consigliabile che le cellule convergono al 70-85% durante la trasfezione formale;

b) Prima della trasfezione, rimuovere il mezzo di coltura cellulare originale, lavare 1-2 volte con PBS e sostituire 1,8 ml priva di siero o basso-siero (meno del 5%) di base di base o opti-mem; Le cellule diverse sono sessuali dipendenti dal siero sono diverse, regolate in base a specifici tipi di celle.

c) Posizionare le celle sostituite nell'incubatore e iniziare a preparare il complesso di transfezione.

2. Preparativi prima della trasfezione delle cellule di sospensione:

a) il giorno della trasfezione, centrifugare la quantità appropriata di celle per rimuovere il mezzo e risospendere loro nel mezzo di base sierico senza siero (meno del 5%);

b) Posizionare le celle di sospensione preparate nell'incubatore e iniziare a preparare il complesso di transfezione. Il rapporto del volume tra il complesso di trasfezione e il mezzo di coltura possono essere regolati con riferimento al rapporto tra i ratio delle cellule aderenti.

3. Preparazione del complesso di transfezione:

a) Preparare la soluzione A: 100 μl di medium basali privi di siero e 2 μg di DNA plasmido, mescolare bene con pipettaggio;

b) Preparare la soluzione B: 100 μl di medio basale libero da siero e 6-8 μl di reagente di trasfezione PEI 40 K, mescolare bene soffiando e aspirando;

c) Aggiungi soluzione B alla soluzione A, mescolare delicatamente con pipettaggio e incubazione a temperatura ambiente per 15 minuti per formare un complesso di transfezione del DNA-Pei.

4. Celle transfettate:

a) Aggiungere il complesso di transfezione ottenuto nel passaggio precedente disegnando una croce o un cerchio alla piastra del pozzo che è stato precedentemente sostituito;

b) tenere la piastra bene e disegnare un \"8 \" sulla superficie piana o agitare delicatamente la piastra di coltura in altri modi per renderlo completamente miscelato e incubare in un incubatore di 37 ° C, 5% di CO2;

c) Il complesso di trasfezione del DNA-pei è incubato con le cellule per 4-6 ore per avere una migliore efficienza di trasfezione. L'incubazione prolungata o durante la notte avrà una migliore efficienza di trasfezione.

Precauzioni

1. Si prega di utilizzare cellule sane in buone condizioni. Si raccomanda che le cellule recuperate siano passate almeno 2 volte prima della trasfezione.

2. Si prega di utilizzare plasmidi ad alta qualità endotossina.

3. I livelli di siero elevati durante la trasfezione e l'uso di antibiotici possono influire sull'efficienza del transfezione e dallo stato cellulare.

4. La tolleranza e la sensibilità delle diverse cellule sono diverse. La lunghezza del tempo di incubazione del trasfezione e il rapporto tra uso PEI / DNA possono essere regolati in base alla situazione.

5. Questo prodotto viene utilizzato solo per la ricerca scientifica, non per gli umani.

6. Si prega di indossare cappotti di laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

Tabella allegata: utilizzo di trasfezione di diverse navi coltura cellulare (solo per riferimento)

Nave della cultura

Area di crescita

(Cm2)

Numero di cellule inoculate

Importo del DNA

(uG)

Pei.

(Μl)

Volume complesso di transfezione(Μl)

capacità totale

(Ml)

96Well Plate.

0.3

(2-4) × 104

0.1

0,3-0.4.

10

0.1

Piastra 24well.

1.9

(1.2-2.4) × 105

0,5-1.

1.5-4.

50

0.5

12well plate.

3.8

(2.4-4.8) × 105

1-2.

3-8.

100

1

6well plate.

9.5

(6-10) × 105

2-4.

6-16.

200

2

10 cmpetri

55

(4-6) × 106

12-24.

36-96.

1000

12

T75Culture Bock.

75

(6-10) × 106

18-36.

54-144.

1000

15

Questo prodotto è solo per scopi di ricerca scientifica, non per la diagnosi clinica!

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