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Reagente di biologia molecolare liquido di estrazione RNA

  • G3013-100ML.

Descrizione del prodotto

Introduzione al prodotto:

Questa soluzione di estrazione dell'RNA del prodotto è un reagente utilizzato per l'estrazione totale dell'RNA dalle cellule o dai tessuti. Utilizza isotiocianato di Guanidina e altre sostanze per le cellule lisse rapidamente per rilasciare RNA ed estrarla in fenolo. Allo stesso tempo, contiene inibitori rnasi per prevenire la degradazione dell'RNA e mantenere l'integrità dell'RNA.

Contenuto del pacco:

Gatto. No.

Descrizione del prodotto

Volume

G3013.

Soluzione di estrazione dell'RNA.

100ml.

Condizioni di conservazione:

Trasporto della borsa di ghiaccio bagnata; Immagazzinato a 4 ℃ temperatura, valido per 12 mesi.

Utilizzo:

LF auto-preparato, alcool isopropilico, acqua di DEPC, etanolo del 75% (preparazione dell'acqua DEPC).

1. lisi di un campione di cellule o tessuti

Cellule aderi: Rimuovere il mezzo di coltura cellulare, celle pulite con una quantità appropriata di PBS pre-raffreddamento e disattiva il PBS il più possibile. Aggiungere l'estratto dell'RNA alla piastra di pozzo secondo la quantità di estratto di 1 ml di RNA per la piastra di 6 pozzetti e l'estratto di RNA da 0,5 ml per la lastra 12-pozzetto, si agita delicatamente per rendere le cellule nella parte inferiore della piastra, contattare completamente l'estratto dell'RNA, Blow le cellule con pistola con pipetta per rendere le celle lise, quindi trasferire al tubo della centrifuga e lasciare stare a temperatura ambiente per 5 minuti.

Sospendi cellule: le cellule sono state raccolte mediante centrifugazione, e il supernatante è stato rimosso il più lontano possibile. L'estratto dell'RNA da 1 ml è stato aggiunto ad ogni celle da 1-10x106, e le cellule sono state soffiate più volte con la pistola con pipetta da scendere, quindi le cellule sono state lasciate in piedi a temperatura ambiente per 5 minuti.

Esempio di tessuto: tagliare il tessuto in piccoli pezzi e metterli in un omogeneizzatore pre-raffreddato. Aggiungere 1 ml di estratto di RNA per ogni 100 mg di tessuto e omogeneizzazione fino a quando non sono visibili pezzi di tessuto. I frammenti del tessuto sono stati separati dalla centrifugazione a 12000 g a 4 ℃ per 10 minuti, e il supernatante è stato trasferito in una nuova provetta da centrifuga.

2. Estrazione dell'RNA: 380LUL LF è stato aggiunto a ciascun estratto di RNA da 1 ml, e quindi il tubo della centrifuga è stato scosso violentemente per 15 secondi da miscelazione di Eddy o sottosopra, e lasciato per 3 minuti a temperatura ambiente.

3. Centrifugazione: centrifuga a 12000 g a 4 ℃ per 15 minuti, trasferire con cautela la fase acquosa incolore superiore al nuovo tubo della centrifuga e assorbire 500-550ul per ml di estratto.

4. RNA precipitato: 550UL isopropanolo è stato aggiunto al tubo di estratto di fase acquoso raccolto sopra, mescolato leggermente a testa in giù per più volte, e precipitato a -20 ℃ per 15 minuti.

5. Centrifugazione: centrifugata a 4 ℃ per 10 minuti a 12000 g, la precipitazione bianca era visibile nella parte inferiore del tubo, che era rna totale e il supernatante è stato scartato.

6. Lavaggio: aggiungi 1 ml 75% etanolo e mescolarlo sottosopra. Dopo la centrifugazione a 12000 g per 5min a 4 ℃, il supernatante è stato scartato e poi centrifugato brevemente ad alta velocità (5000 g per 3-5s). Il liquido è stato accuratamente risucchiato con una micro testa di aspirazione.

7. Dissoluzione dell'RNA: il tubo della centrifuga con precipitazione dell'RNA è stato lasciato aperto per 3-5 minuti. Dopo che l'RNA è stato leggermente essiccato, è stata aggiunta l'acqua del 20L DEPC per rendere l'RNA completamente disciolto, che potrebbe essere utilizzato per il rilevamento della concentrazione e gli esperimenti di follow-up. Fai attenzione a non asciugare troppo l'RNA, altrimenti sarà difficile dissolversi e influenzerà il rapporto A260 / 280.

Appunti:

1. Tutti i consigli della pipetta e i tubi della centrifuga sono privi di contaminazione rnase. Puoi acquistare materiali di consumo sterili senza enzimi dalla nostra azienda.

2. Questo reagente contiene isotiocyanato di guanidina e fenolo rivestemato. Evitare il contatto con la pelle o l'inalazione.

3. Si prega di indossare abiti da laboratorio e guanti monouso.

G3013-100MLA.Fetta 13.downloadimimg.Fetta 11.Fetta 12.Fetta 10.

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