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Kit immunoistochimica Kit anticorpo anticorino anticorpo anticorino in due fasi

  • G1216-200T.
  • Servicebio.

Descrizione del prodotto

introduzione al prodotto


Questo kit è un kit immunoistochimica in due fasi ad alta sensibilità, adatto per il successivo sviluppo del colore degli anticorpi i cui anticorpi primari derivano dai topi. Il kit contiene IgG anti-mouse coniugati di goat perossidasi di rafano. Questo prodotto è adatto per anticorpi primari derivati ​​da mouse. Negli esperimenti di IHC e Western Blot, gli anticorpi secondari anticorini anti-mouse con l'etichetta HRP sono combinati con l'anticorpo primario derivato da mouse (reagisce con l'antigene prima) è combinato e quindi reagisce con DAB. DAB è un substrato di perossidasi rafano (HRP). Sotto la catalisi di HRP, DAB produce precipitati marroni per raggiungere l'amplificazione del segnale e lo sviluppo del colore.


Stoccaggio e trasporto


Trasporto in ghiaccio bagnato; Conservare l'anticorpo secondario a -20 ° C e memorizza la diluizione del DAB e la soluzione di magazzino da 50 × DAB a 4 ° C; Il periodo di validità è di 12 mesi.


Pronto a lavorare


1. Porta i propri PBS (consigliati G4202, G0002), reagenti per il countersting nucleare (soluzione di colorazione di ematossilina consigliata G1004, soluzione di differenziazione dell'ematossilina G1039, ematossilina che ritorna la soluzione blu G1040), alcool gradiente, xilene, tablet di montaggio, ecc.


2. Preparare la soluzione di lavoro dell'anticorpo secondario: diluire l'anticorpo secondario anticorino anti-mouse con l'etichetta HRP con PBST (pH 7.2-7.4) in un rapporto tra 1: 200 per ottenere la soluzione di lavoro dell'anticorpo secondario. Preparato per uso immediato, utilizzare entro 48 ore.


3. Preparare la soluzione di lavoro per lo sviluppo del colore DAB: aggiungere 20 μl di soluzione di scorta di 50 × DAB a ogni 1 ml di DAB Diluent, mescolare bene per un uso successivo. Preparato su richiesta, pronto per l'uso ora.




Passi


1. Secondo le procedure di routine immunoistochimiche, le sezioni del tessuto sono pre-deparaffinized, antigene recupero, bloccate e incubate con anticorpo primario, quindi lavato tre volte con PBS per 5 minuti ciascuna.


2. Incubazione anticorpale secondaria: aggiungere 50-100 μl della soluzione di lavoro anticorpale secondaria a ciascuna fetta per coprire completamente il tessuto e incubare a temperatura ambiente per 30-60 min. Lavare tre volte con PBS per 5 minuti ogni volta.


3. DAB Sviluppo del colore: aggiungere 50-100 μl di soluzione di lavoro DAB a goccia a ciascuna fetta, incubare per diversi minuti a temperatura ambiente, osservare sotto un microscopio per controllare lo sviluppo del colore all'effetto previsto, quindi lavare immediatamente con acqua per fermare il Sviluppo del colore


4. (opzionale) Ripristino dei nuclei cellulari: le sezioni sono macchiate con soluzione di colorazione di ematossilina per 3-5 minuti, quindi lavato con acqua del rubinetto; Dopo una rapida differenziazione con la soluzione di differenziazione di ematossilina per 3-5 s, quindi lavato con acqua del rubinetto; Lavato con acqua del rubinetto o restituita a blu con soluzione di ematossilina 3-5 s.


5. Montaggio: le fette sono disidratate da alcool gradiente secondo i soliti passaggi, lo xilene è trasparente e le diapositive sono montate con gomma neutra.




Precauzioni


1. Se lo sfondo è troppo scuro durante lo sviluppo del colore immunoistochimico, prendere in considerazione l'estensione del tempo di lavaggio, utilizzare una soluzione di blocco appropriata per il blocco, inattivare la catalasi endogena, accorcia il tempo di sviluppo del colore e ridurre la concentrazione dell'anticorpo secondario. Se non vi è uno sviluppo del colore o lo sviluppo del colore è troppo leggero, è possibile aumentare in modo appropriato la concentrazione dell'anticorpo primario e dell'anticorpo secondario per estendere il tempo di sviluppo del colore, quindi verificare se l'anticorpo secondario è normalmente sviluppato.


2. DAB è dannoso per il corpo umano, si prega di fare attenzione quando si la maneggia e si prende cura di evitare il contatto diretto con il corpo umano o l'inalazione del corpo.

G1216-200T.

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