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Kit di sintesi di CDNA Syscript RT II First Strand CDNA

  • G3332-50.

Descrizione del prodotto

Introduzione al prodotto:

Questo prodotto utilizza la trascrittasi inversa mutante modificata per sintetizzare il primo filo di cDNA con RNA o mRNA totale come modello per una trascrizione inversa efficiente. Il kit contiene tutti i reagenti necessari per sintetizzare il primo filo di cDNA con alta qualità, e fornisce due tipi di primer di sintesi di CDNA per la scelta: il primer ad esaxer casuale e OLIGO (DT) 18 Primer sintetizzato Prodotti cDNA sintetizzati sintetizzati che possono essere direttamente utilizzato per le successive reazioni PCR o QPCR. SWESCRIPSCR RT II (TranscriptSeseseSex) è una trascrittasi inversa mutante in base alla trascrittasi inverso M-MLV e ottenuta tramite lo screening evolutivo in vitro. SWESCRICT RT II non ha attività rnase h. Il degrado dell'RNA nel modello dell'ibridazione del DNA / RNA durante la prima reazione di sintesi del cDNA del primo filo è stato evitato, in modo da garantire la quantità e la lunghezza della prima sintesi del cDNA del filo. Rispetto all'enzima di tipo selvaggio e alla prima generazione di SWESCRICT RT I, la seconda generazione di SWESCRICT RT II ha ulteriormente migliorato la stabilità termica e l'efficienza della sintesi della CDNA. Può sintetizzare in modo efficiente il cDNA nell'intervallo di 42-65 ℃ e completare la reazione inverso della trascrizione non appena 5 minuti, particolarmente adatto per la trascrizione inversa dell'RNA con struttura complessa.

Contenuto del pacco:

Gatto. No.

Descrizione del prodotto

Volume

G3332.

Kit di sintesi di CDNA Syscript RT II First Strand CDNA

50RXNS / 100RXNS.

Componenti:

Numero di componenti

Componente

G3332-50.

G3332-100.

G3332-1.

Mix enzimatico SWESCRICT RT IIa

50L

100UL

G3332-2.

5 × Buffer di reazioneb

200L.

400Le.

G3332-3.

OLIGO (DT) 18 Primer (100UM)

50L

100UL

G3332-4.

Primer esassori casuale (100um)

50L

100UL

G3332-5.

Acqua senza nucleasi

1 ml.

1 ml.

Manuale

1 pc

1 pc

a: Con inibitore rnase

b: Con miscela DNTP e mg² +

Condizioni di conservazione:

Trasporto della borsa di ghiaccio bagnata; Immagazzinato a -20 ℃ temperatura, valido per 12 mesi.

Utilizzo:

Il primo passo per la sintesi di cDNA

1. Preparazione del sistema di reazione della trascrizione inversa (sistema di reazione consigliato 20L)

Componente

Volume

5x buffer di reazione

4ul

OLIGO (DT) 18 Primer (100UM)

1UL.

o primer esassori casuali (100um)

o 1ul

o primer specifico del gene (2um)

o 1ul

Swsescript RT I Enzyme Mix

1UL.

Totale RNA / mRNA *

0,1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug

Acqua senza nucleasi

Aggiungi a 20UL.

Nota: per il GC elevato o i modelli complessi, il modello RNA, i primer di trascrizione inversa e l'acqua senza nucrenasi possono essere mescolati in anticipo e quindi raffreddati su ghiaccio rapidamente dopo essere tenuto a 65 ℃ per 5 minuti. E poi aggiungi gli altri componenti di reazione.

2. Mescolare delicatamente e centrifugare;

3. Impostazione del programma di trascrizione inversa:

Temperatura

Time

25 ℃.a

5 minuti

50 ℃.b

15-30 min.

85 ℃.

5 S.

A: Ad esempio, il primer ad esaxer casuale è selezionato e incubato a 25 ℃ per 5 minuti, la reazione successiva viene eseguita. Se si sceglie di utilizzare OLIGO (DT) 18 Primer o Gene Specific Primer, è possibile condurre direttamente una reazione a 55 ℃;

B: per elevati modelli GC o complessi, la temperatura della trascrizione inversa può essere sollevata a 65 ℃.

Appunti:

1. Si prega di indossare guanti monouso durante il funzionamento per evitare la contaminazione rnase.

2. I prodotti a trascrizione inversa possono essere memorizzati a -20 ℃ per un breve periodo. Se è necessario lo stoccaggio a lungo termine, si consiglia di memorizzarli a -80 ℃ dopo il confezionamento per evitare cicli di congelamento ripetuti.

3. Se il modello è di origine eucarinotica, si consiglia di selezionare Oligo (DT) 18 Primer e accoppiarlo con il Poly di 3 'una coda di mRNA eucariotica per ottenere la resa più alta del cDNA a figura intera.

4. Per la trascrizione inversa del RNA procariotico, dovrebbe essere utilizzato il primer ad esaxer casuale o il primer specifico del gene.

5. Il primer esassori casuale ha un'ampia applicabilità ed è adatto per mRNA, RRNA, TRNA, piccoli modelli RNA e LNCRNA.

6. Se la trascrizione inverso è seguita da QPCR ASTAY, PRIMER OLIGO (DT) 18 PRIMER e RANOMAND HEXAMER PRIMER può essere miscelato per rendere l'efficienza della sintesi di CDNA in tutte le regioni dell'mRNA lo stesso, che aiuta a migliorare l'autenticità e la ripetibilità dei risultati quantitativi.

G3332-50A.

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