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Kit di rilevamento quantitativo proteico BCA 200T

  • G2026-200T.

Descrizione del prodotto

Introduzione al prodotto:

Esistono due metodi più comunemente usati per il rilevamento quantitativo della concentrazione di proteine: Bradford e BCA. Il principio di base del rilevamento quantitativo delle proteine ​​mediante il metodo BCA si basa sulla reazione di BAURET, cioè il CU2 + è ridotto in condizioni alcaline Cu +, e poi chelating con BCA (acido bicinchonico, agente cromogenico). Ogni molecola che elabica una Cu, per formare un complesso viola idrosolubile. La sostanza ha il più alto valore di assorbimento a 562 nm e la profondità del colore è proporzionale alla concentrazione di proteine, quindi può essere utilizzata per il rilevamento quantitativo di proteine, la concentrazione di proteine ​​ha una buona relazione lineare nell'intervallo 50-2000μg / ml di concentrazione.

Questo metodo non è influenzato dalle sostanze chimiche nella maggior parte dei campioni, compatibile con alte concentrazioni di rimozione della scala, SDS, con concentrazioni fino al 5% incluso il 5% del Tritone X-100, il 5% di Tween-20,60,80, ecc. . Ma gli agenti chelanti e le alte concentrazioni di elevate concentrazioni di agenti riducenti influenzano i risultati, assicurarsi che nessun EGTA, in campioni la concentrazione EDTA inferiore a 10 mm, DTT inferiore a 1 mm, β-mercaptoetanolo è inferiore a 1 mm. Se il campione contiene un agente chelante o un agente di riduzione, prendi in considerazione i nostri altri prodotti G2001 Kit di rilevamento quantitativo proteico di Bradford.

Contenuto del pacco:

Gatto. No.

Descrizione del prodotto

Volume

G2026.

Kit di rilevamento quantitativo di proteine ​​BCA

200t.

Componenti:

Numero di componenti

Componente

G2026-200T.

G2026-1.

BCA Reagente

2 × 100 ml

G2026-2.

Soluzione di solfato di rame.

5 × 1,2 ml

G2026-3.

BSA.

5 × 25 mg

G2026-4.

Soluzione BSA.

5 × 1,5 ml

Condizioni di conservazione:

L'intero kit reagenti può essere trasportato a temperatura ambiente; Protein Standard (BSA) è memorizzato a 4 ℃, valido per 12 mesi. Dopo la soluzione standard proteica, memorizzato a -20 ℃ e utilizzato entro 6 mesi. I reagenti rimanenti sono conservati a temperatura ambiente e validi per 12 mesi.

Utilizzo:

1. Soluzione di riserva standard della proteina: la soluzione di preparazione standard di proteine ​​da 1 ml è stata aggiunta alla tubi standard della proteina BSA e lo standard di proteine ​​da 25 mg è stato completamente dissolto, cò è stata la soluzione di riserva standard proteica con concentrazione di 25 mg / ml. La soluzione standard proteica può essere conservata per -20 ℃ per lungo tempo.

2. Preparazione della soluzione di lavoro standard di proteine: assumere una quantità appropriata di una soluzione di riserva standard di proteine ​​da 25 mg / ml, diluire 50 tonnellate con PBS o normale soluzione salina, ottenere la soluzione di lavoro standard proteica con concentrazione finale di 0,5 mg / ml. Prestare attenzione alla diluizione secondo il metodo di gradiente 10 volte per garantire una diluizione accurata.

3. Curva standard (metodo di etichettatura enzimatico): la soluzione di lavoro standard proteica è stata aggiunta a 96 piatti ben piatti secondo 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20L rispettivamente, e quindi aggiunto 20, 19, 18, 16 , 12, 8, 4, 0UL con PBS o normale soluzione salina, e quindi la soluzione di lavoro gradiente è stata rifornita a 20L. Quindi è stata ottenuta la curva di gradiente della concentrazione di proteine ​​di 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500ug / ml.

4. Preparazione dei campioni da testare: i campioni di proteine ​​da testare sono correttamente diluiti (la concentrazione di proteine ​​del campione può essere rilevata nella curva standard per garantire che i risultati del test siano credibili) e aggiunti alla piastra ben pozzetta la quantità di 20 μl per campione. Il campione da testare e lo standard proteico è stato diluito con la stessa soluzione.

5. Preparazione della soluzione di lavoro cromogenica BCA: la soluzione BCA reagente e solfato di rame sono state miscelate uniformemente secondo 50: 1 rapporto del volume per ottenere la soluzione di lavoro cromogenica BCA. Il fluido di lavoro cromogenico BCA può essere immagazzinato a temperatura ambiente per 24 ore. Ogni campione da testare deve esigere 200 μl, suggerito di essere preparato su richiesta per evitare rifiuti.

6. Test: aggiungere 200 μl, del fluido di lavoro cromogenico BCA al foro di campionamento della curva standard e del foro del campione da testare il pozzetto (96 pozzo può essere posizionato su oscillatore per 30 secondi), 37 ℃ dopo 30 minuti di reazione, utilizzando la curva standard 0 Come riferimento, colorimetria a 562 nm lunghezza d'onda, registra l'assorbanza di ciascun foro. (Nota: la reazione può anche essere a temperatura ambiente 2 ore, o 60 ℃ reazione 30 min. Se la concentrazione di proteine ​​è bassa, si consiglia di reazione di 60 ℃)

7. Calcolo: la curva standard viene disegnata con contenuto proteico gradiente (μg / ml) come coordinata orizzontale e assorbisti come coordinata verticale. Secondo l'assorbimento del campione, la concentrazione di proteine ​​(μg / ml) del campione da testare nel foro corrispondente può essere trovato sulla curva standard, quindi moltiplicato per la diluizione multiplo del campione è la concentrazione di proteine ​​effettiva di il campione da testare.

Appunti:

1. Il rilevamento quantitativo della proteina BCA è fortemente influenzato dalla temperatura e dal tempo, il valore di assorbanza cambierà con il prolungamento del tempo o l'aumento della temperatura. Se il tempo e la temperatura della reazione del colore non possono essere controllati accuratamente, si suggerisce che una curva standard dovrebbe essere fatta per ogni determinazione.

2. Quando si prepara la soluzione di riserva standard delle proteine, è necessario garantire una dissoluzione sufficiente. Quando si diluente la soluzione di funzionamento standard della proteina, si consiglia di diluire 10 volte gradiente, non di diluire 50 volte alla volta, in modo da evitare un errore di grandi dimensioni.

3. Al fine di garantire la quantificazione accurata della proteina, è meglio scegliere la stessa soluzione tampone per l'estrazione del campione e la diluizione dello standard proteico, che è coerente con le condizioni di rilevamento. Se il buffer stesso ha un elevato valore di sfondo, si consiglia di utilizzare altri metodi.

4. Si prega di indossare abiti da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

Fetta 10.

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