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Kit di rilevamento della vitalità cellulare della Calcein AM (CCK-F)

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Volume: 1.00t.

  • G1609-100T.
  • Servicebio

Descrizione del prodotto

Informazioni sul prodotto

nome del prodotto

Gatto. No.

Spec.

Kit di rilevamento della vitalità cellulare della Calcein AM (CCK-F)

G1609-100T.

100t.

G1609-500T.

500t.

Calcein AM è basato su Calcein (Calcein), introducendo un gruppo di acetometossimetil (AM). Il Gruppo AM non solo maschera la parte molecolare del calcio chelante di calcein, ma aumenta anche la sua idrofobicità, quindi può consentire che la calcein penetri facilmente nella membrana delle cellule viventi ed è scissata in calcein dall'esterasi endogena della cella. La calcein che ha perso il gruppo AM non può facilmente passare attraverso la membrana cellulare ed è quindi mantenuta nella cella; Inoltre, la parte della molecola chelante di calcio è esposta, consentendo alla sonda di calceina di legarsi agli ioni di calcio nelle cellule viventi ed emettono una forte fluorescenza verde. La mancanza di esterasi nelle cellule morte non consente a Calcein am di essere idrolizzata in calcein, quindi le cellule morte non possono essere etichettate. La calcein AM ha una basse citotossicità e ha scarso effetto sulle funzioni cellulari, come la proliferazione cellulare o la chemiotaxis linfociti. È una sonda fluorescente molto adatta per colorazione cellule dal vivo.

Questo kit di rilevamento della cellula Calcein AM del prodotto è chiamato anche il kit di conteggio della fluorescenza cellulare (CCK-F), che utilizza la sonda fluorescente di Calcein am per etichettare le cellule vive per valutare la vitalità cellulare, la tossicità e la proliferazione. Kit di rilevamento. Dopo l'ottimizzazione e il debug, questo kit non ha solo un'elevata sensibilità di rilevamento e un'ampia gamma lineare ampia, ma ha anche bisogno di un breve periodo di incubazione per completare il rilevamento delle cellule. L'operazione è semplice, non richiede l'etichettatura radioisotopica e non richiede gradini come la dissoluzione del cristallo, che può ridurre gli errori causati da operazioni sperimentali e migliorare la precisione e la ripetibilità.

Stoccaggio e trasporto

Trasporto di sacchetto di ghiaccio (ghiaccio bagnato);

Conservare a -20 ° C. La soluzione di calcein am dovrebbe essere conservata nel buio e il congelamento ripetuto e lo scongelamento deve essere evitato il più possibile; È valido per 12 mesi.

Elenco prodotti:

Gatto. No.

Descrizione del prodotto

Volume

G5051-100ml.

Grado biochimico DMSO di dimetilsolsoxide DMSO

100ml.

Stoccaggio e trasporto

Conservazione e trasporto a temperatura ambiente, valida per 2 anni.

Componente

Numero di componenti

Componente

G1609-100T.

G1609-500T.

G1609-1.

Calcein am Soluzione

10 μl.

50 μl.

G1609-2.

Buffer di rilevamento cck-fd

10 ml

50 ml

Manuale

1

Passi di funzionamento:

1. Preparazione della soluzione di lavoro di rilevamento della calcein am:

Secondo la quantità di utilizzo di 100 μL di un pozzo per 96 pozzetti, consultare la tabella seguente, mescolare la soluzione di calcein am e il buffer di rilevamento CCK-F in proporzione per preparare la soluzione di lavoro di rilevamento della calcein am.

Componente

10campioni di PCS.

50campioni di PCS.

100campioni di PCS.

Calcein am Soluzione

1 μl.

5 μl.

10 μl.

CCK-F Rilevation Buffer

1 ml

5 ml

10 ml

2. Rilevamento delle cellule aderente:

I seguenti passaggi corrispondono principalmente allo schema di rilevamento della lastra di 96 pozzetti, e altri sistemi di piastre ben dotati devono essere adeguati in base alla situazione.

un. Piastra di semina cellulare: seme uniformemente le cellule in una lastra di 96 pozzetti ad una certa densità, e applicare farmaci o altri pre-trattamenti per loro (la densità di semina è determinata da fattori come dimensioni della cella, tasso di crescita, ecc.);

B. (Facoltativo) Lavaggio cellulare: aspirare il mezzo di coltura originale e lavare 1-2 volte con il buffer PBS (consigliato G4202) per ridurre l'interferenza di siero, fenolo rosso o droga sui risultati sperimentali;

C. Etichettatura della sonda: Dopo aver rimosso il mezzo di coltura cellulare o il buffer PBS, aggiungere 100 μl di soluzione di lavoro di rilevamento della calcein AM e incubare a 37 ° C al buio per 30 minuti;

un. (Facoltativo) Incubazione cellulare: modificare il mezzo di coltura cellulare e continuare a incubare per 15-30 minuti per garantire che la calcein am nelle cellule sia completamente idrolizzata;

B. Rilevamento della fluorescenza: utilizzare un lettore di micropiastre per la lettura della fluorescenza, la lunghezza d'onda massima di eccitazione della sonda di calcein am è 501 Nm e la lunghezza d'onda massima di emissione è 521 Nm. L'attività cellulare è direttamente proporzionale all'intensità di fluorescenza. Secondo diversi scopi sperimentali, i nuclei cellulari possono essere ulteriormente contaminati o rilevati da altri strumenti (come il microscopio a fluorescenza).

1. Rilevamento delle cellule sospese:

un. Semina cellulare: cellule semi uniforme in una piastra a 24 pozzetti a una certa densità, e applicare farmaci o altri pre-trattamenti per loro (la densità di semina è determinata da fattori come dimensioni della cella, velocità di crescita, ecc.);

B. (Opzionale) Lavaggio cellulare: Centrifuga a 1000 g per 3-5 minuti per rimuovere il mezzo originale e lavare 1-2 volte con il buffer PBS, ogni volta che è necessario 1000 G centrifugazione per 3-5 minuti per ridurre il siero, il fenolo rosso o interferenze di droga con risultati sperimentali;

C. Etichettatura della sonda: Dopo la centrifugazione a 1000 g per 3-5 minuti, rimuovere il mezzo di coltura cellulare o il buffer PBS, aggiungere una quantità appropriata della soluzione di lavoro di rilevamento della calcein am e incubare per 30 minuti a 37 ° C al buio;

D. (Facoltativo) incubazione cellulare: modificare il mezzo di coltura cellulare e continuare a incubare per 15-30 minuti per garantire che la calcein am nelle cellule sia completamente idrolizzata;

e. Rilevamento della fluorescenza: utilizzare un lettore di micropiastre o un citometro a flusso per il rilevamento della fluorescenza. La lunghezza d'onda massima di eccitazione della sonda di calcein am è di 501 nm e la lunghezza d'onda massima delle emissioni è 521 Nm. L'attività cellulare è direttamente proporzionale all'intensità di fluorescenza. Secondo diversi scopi sperimentali, i nuclei cellulari possono essere ulteriormente contaminati o rilevati con altri strumenti (come il microscopio a fluorescenza).

Appunti:

1. La soluzione di calcein am è centrifugata per un breve periodo prima dell'uso per ridurre la perdita del reagente.

2. Evitare il congelamento ripetuto e lo scongelamento della soluzione di calcein am. Dopo aver ricevuto il prodotto, si consiglia di adeguatamente aliquot e conservarlo in un contenitore sigillato a -20 ° C al buio.

3. La calcein am è instabile in soluzione acquosa. La soluzione di lavoro di rilevamento della calcein am deve essere preparata per uso immediato, e sarà efficace entro 24 ore.

4. A causa di diversi stati cellulari, il tempo di incubazione e la concentrazione della soluzione di lavoro di rilevamento della calcein am possono essere regolati in base alla situazione.

5. Quando si utilizza un lettore di micropiastre per misurare l'intensità della fluorescenza, utilizzare una piastra di coltura cellulare nera.

6. I coloranti fluorescenti hanno problemi di spegnimento. Si prega di operare e conservarli lontano dalla luce.

7. Per la tua salute e sicurezza, si prega di indossare cappotti e guanti da laboratorio durante il funzionamento.

Questo prodotto è solo per scopi di ricerca scientifica, non per la diagnosi clinica!

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