TELEFONO

+86 (027) 5111 3188

categoria di prodotto

Condividi su:

Kit di rilevamento del ciclo cellulare e dell'apoptosi

Volume: 50t.

  • G1700-50t.
  • Servicebio

Descrizione del prodotto

Informazioni sul prodotto

nome del prodotto

Gatto. No.

Specifiche

Kit di rilevamento del ciclo cellulare e dell'apoptosi

G1700-50t.

50t.

Introduzione al prodotto:

Il ciclo cellulare si riferisce all'intero processo che una cellula attraversa il completamento di una divisione alla fine della prossima divisione. È principalmente diviso in due fasi: l'interfase e la mitosi (fase m); La fase intercellulare è composta principalmente dalla prophase della sintesi del DNA (fase G1). ), La fase di sintesi del DNA e la sintesi della fine del DNA (fase G2). La sequenza di cambiamenti nell'intero ciclo cellulare può essere rappresentata da G1 → S → G2 → m. In primo luogo, il periodo G1: la cella sintetizza principalmente RNA e proteine ​​e altre sostanze per preparare la cella per materiale ed energia per entrare nella fase S; Quindi entra nella fase S: ​​la cella inizia a sintetizzare il DNA e alcuni istoni e il contenuto del DNA della cella inizia ad aumentare; Infine a G2 Stage: in questo momento, il contenuto del DNA della cella è diventato il doppio del periodo del G1 e la replica del DNA si è fermato e una grande quantità di proteine ​​e altre sostanze sono sintetizzate per entrare nel periodo di mitosi; Se G0 (le celle smettono temporaneamente il periodo di divisione e di differenziazione), fase quiescent) / fase G1, il contenuto del DNA nella cella è 1N; Quindi il contenuto del DNA nella cella nella fase G2 è 2N; E la cella di fase S nella fase G1 e G2, il contenuto del DNA è compreso tra 1N e 2N; E nelle cellule apoptotiche, il nucleo subisce la condensa e la frammentazione del DNA, con conseguente perdita di alcuni frammenti genomici del DNA, quindi il suo contenuto del DNA è inferiore a 1N. Il cosiddetto picco sub-g1 appare sull'immagine di fluorescenza della citometria del flusso, cioè celle apoptotiche. picco. Pertanto, il ciclo e lo stato della cella possono essere giudicati in base al contenuto del DNA cellulare.

L'apoptosi può anche essere rilevata osservando i cambiamenti nella dispersione della luce delle cellule con un citometro a flusso. Quando una cellula subisce apoptosi, i corpi apoptotici sono prodotti a causa della condensazione del citoplasma e della cromatina e della frammentazione nucleare, che modifica le proprietà di dispersione della luce della cella. Nella fase iniziale dell'Apoptosi, la cromatina si restringe, la densità cellulare aumenta, e il colore di dispersione della luce angolare in avanti è significativamente ridotto; Nella fase tarda dell'apoptosi, le cellule producono corpi apoptotici e lo scattering della luce angolare in avanti e la dispersione della luce angolare laterale sono significativamente ridotti.

Il kit di analisi del ciclo cellulare e dell'apoptosi utilizza il classico metodo di colorazione del propidio per rilevare e analizzare il ciclo cellulare e l'apoptosi. L'utilizzo dello ioduro del propidio può essere incorporato in DNA a doppia fila e renderlo fluorescente e l'intensità della fluorescenza è proporzionale al contenuto del DNA a doppia fila; Combinato con le modifiche regolari nel contenuto del DNA in diversi cicli di cellule, può distinguere il ciclo e lo stato della cella. Questo kit può essere utilizzato per il ciclo cellulare e il rilevamento dell'apoptosi delle celle del tessuto, delle celle aderenti o sospese (se utilizzata per il ciclo della cella del tessuto e il rilevamento dell'apoptosi, il tessuto deve essere digerito in uno stato di cella singola prima che il rilevamento possa essere eseguito).

Stoccaggio e trasporto

Trasporto in ghiaccio bagnato; conservare nel buio a -20 ° C e conservare nel buffer di colorazione a 4 ° C; Valido per 12 mesi.

Componente

Numero di componenti

Componente

G1700-50t.

G1700-1.

Soluzione di colorazione PI (50 ×)

500 μl.

G1700-2.

Rnase un reagente (50 ×)

500 μl.

G1700-3.

Buffer di colorazione

25 ml

Manuale dell'utente del prodotto

1 pc

Preparazione dell'esperimento

1. Mezzo di coltura cellulare contenente siero;

2. La soluzione di digestione tripsina (è raccomandata la G4001);

3. BUFFER PBS (consigliato G4202);

4. 75% di etanolo.

Passi di funzionamento:

1. Preparazione del campione cellulare (il numero di celle è controllato a 1 × 105 ~ 1 × 106)

1.1. Per cellule aderenti: rimuovere il mezzo di coltura, aggiungere la soluzione di digestione di tripsina per digerire le cellule, osservare le cellule per diventare rotonda e allentarsi sotto il microscopio, aggiungere una quantità appropriata del mezzo di coltura cellulare contenente siero per fermare la digestione, soffiare delicatamente le cellule fare la sospensione delle cellule; Trasferire la sospensione a un tubo della centrifuga, centrifuga a 1000 g per 3-5 minuti, scartare il surnatante e conservare il pellet cellulare; Quindi sciacquare il pellet cellulare con il buffer PBS pre-raffreddato per 1-2 volte, centrifugare e scartare il supernatante allo stesso modo, mantenere il pellet cellulare.

1.2. Per le cellule sospese: trasferire direttamente le cellule in un tubo della centrifuga, centrifuga a 1000 g per 3-5 minuti, scartare il surnatante e conservare il pellet cellulare; Quindi sciacquare il pellet cellulare con il buffer PBS pre-raffreddato per 1-2 volte, e la centrifuga allo stesso modo scartare il surnatante e salvare il pellet cellulare.

1.3. Per le cellule del tessuto: tagliare il tessuto in piccoli pezzi il più possibile, selezionare Typsin, collagenase e altri enzimi digestivi per digerire i pezzi del tessuto in base alla sorgente del tessuto e filtrare con uno schermo in maglia da 100-300 per ottenere una singola cella sospensione; Dopo il filtraggio del trasferimento della sospensione cellulare su un tubo della centrifuga, centrifugare a 1000 g per 3-5 minuti, scartare il supernatante e salvare il pellet cellulare; Quindi risciacquare il pellet cellulare con buffer PBS pre-raffreddamento per 1-2 volte, centrifugare e scartare il supernatante allo stesso modo. Pellet cellulari.

2. Fissazione del campione cellulare

2.1. Aggiungere 1 ml di etanolo del 75% pre-raffreddato su ghiaccio ai campioni di pellet cellulare raccolti e soffiare delicatamente le cellule per renderli completamente contatti;

2.2. Fissare le cellule a 4 ℃ per 30 minuti o più a lungo (di solito il fissaggio per 2 h o più può garantire l'effetto di colorazione e il fissaggio per 12-24 h può essere più efficace, che può migliorare l'effetto di colorazione).

2.3. Dopo il fissaggio per un certo periodo di tempo, centrifugare le cellule a 1000 g per 3-5 minuti, rimuovere il fissativo di etanolo e mantenere il pellet cellulare;

2.4. Toccare il fondo del tubo della centrifuga per disperdere le celle, risospendere e lavare le celle in tampone PBS, centrifugare a 1000 g per 3-5 minuti, scartare il surnatante per raccogliere il pellet cellulare;

3. Preparazione e tintura del fluido di lavoro di tintura

3.1. Preparare la soluzione di lavoro di tintura secondo la seguente tabella ed evitare la luce. La quantità di preparazione può essere aumentata o diminuita nella stessa proporzione in base ai requisiti di utilizzo (la soluzione di lavorazione della tintura finita può essere memorizzata a 4 ° C in breve tempo, si prega di usarlo entro lo stesso giorno);


Campione 1pc.

5pcs campioni.

Campioni 10pcs.

Buffer di colorazione

480 μl.

2,4 ml

4.8 ml

Soluzione di colorazione PI (50 ×)

10 μl.

50 μl.

100 μl.

Reagente rnasea (50 ×)

10 μl.

50 μl.

100 μl.

Capacità totale

500 μl.

2,5 ml

5 ml

3.2. Toccare il fondo del tubo della centrifuga per disperdere le celle precipitate al punto 2.4, quindi aggiungere 500 μl della soluzione di lavorazione della colorazione preparata, pipettatura delicatamente per disperdere le celle e mescolare la soluzione di lavorazione della colorazione;

3.3. Incubare a 37 ° C per 30 minuti al buio, quindi utilizzare la citometria del flusso per il rilevamento.

4. Rilevazione e analisi del flusso

Un citometro a flusso è stato utilizzato per rilevare la fluorescenza rossa alla lunghezza d'onda di eccitazione di 488 nm, durante il rilevamento della dispersione della luce. Utilizzare un software di analisi appropriato per l'analisi del contenuto del DNA cellulare e l'analisi della dispersione della luce.

Appunti:

1. I coloranti fluorescenti hanno problemi di spegnimento della fluorescenza, quindi cercare di evitare la luce durante l'uso e lo stoccaggio;

2. Prima dell'esperimento, si consiglia di sincronizzare il ciclo cellulare per evitare la grande differenza ripetitiva causata dal diverso ciclo cellulare;

3. La densità di piantagione delle cellule sperimentali non dovrebbe essere troppo alta o troppo bassa per evitare l'inibizione del contatto o la dipendenza dalla densità; 4. Quando si maneggia la soluzione di colorazione PI, prestare attenzione alla protezione ed evitare il contatto diretto con il corpo umano o l'inalazione;

5. Si prega di indossare il camice da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

Il prodotto è solo per scopi di ricerca scientifica, non per la diagnosi clinica!

G1700-50t.Reagente -1 (1)downloadimimg.Fetta 13.Fetta 12.Fetta 10.Fetta 14.

Contact us

Link veloci

categoria di prodotto

Entrare in contatto

 5 ° piano, 22 costruzione, biopark, Gaoxin 2nd Road No. 388, zona di sviluppo high-tech del lago orientale, Wuhan, Hubei, Cina 430079
 +86 (027) 5111 3188
Copyright © 2021 Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.