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Kit di colorazione G1073-100T cella di invecchiamento β-galatosidasi

Specifica:100 T.
Uso del prodotto:Colorazione di tessuti senescenti o cellule senescenti.
STOCCAGGIO E TRASPORTO:

La polvere X-GAL è stata sciolta con DMF da 5 ml nel kit, diviso in 1 ml / tubo e memorizzato a -20in modo oscuro per evitare ripetuti congelamenti. Dopo che la soluzione è stata preparata, la durata di scadenza di X-Gal era di 3 mesi. Se continua ad essere utilizzata oltre la data di scadenza, può influire sui risultati sperimentali.

Il kit è valido per un anno.

T:
  • G1073-100T.
  • Servicebio

Descrizione del prodotto


Descrizione del prodotto

La maggior parte delle cellule normali ha una capacità limitata di dividere, e quando non possono dividere, diventano di solito le cellule senescenti. Sono solitamente più grandi e hanno un'espressione di alta β-galattosidasi e l'attività più alta β-galattosidasi può essere rilevata a ph6.0. Il kit è Sulla base di questo principio, mirando all'invecchiamento del livello di regolazione del livello di attività β-galaccoidasi correlato e del tessuto di invecchiamento o del tessuto per la colorazione cellulare. Il GAL è stato utilizzato come substrato per produrre prodotti blu catalizzati da β-galattosidasi specifici della cellula senescente e osservati sotto luce microscopio.

Utilizzo del prodotto
nome del prodotto

Codice

Specifica

Soluzione di fissaggio della colorazione della β-galattosidasi

G1073-1.

100 ml

soluzione di colorazione β-galatosidasi a

G1073-2.

100 ml

β-galatosidasi macchia b

G1073-3.

1,25 ml

DMF.

G1073-4.

5 ml

X-GAL.

G1073-5.

100 mg, polvere, 1 tubo


Utilizzo:


1. Preparazione del regno

(1) Preparazione della tua soluzione tampone PBS.

(2) Polvere X-GAL 100MG è stata completamente dissolta e mescolata con DMF da 5 ml per ottenere una soluzione X-GAL, che è stata quindi divisa in provette da centrifuga da 1,5 ml con 1 ml per ogni provetta e conservata a -20 ℃ lontano dalla luce.

(3) La soluzione di tintura è stata preparata nelle proporzioni mostrate nella tabella seguente:


soluzione di colorazione β-galatosidasi a

940 μl.

β-galatosidasi macchia b

10 μl.

X - GAL Soluzione

50 μl.


2. Passaggio di colorazione

(1) per cellulare aderente

a) Le celle coltivate in piastre 6-pozzi (o diapositive cellulari) sono state aspirate fuori dal terreno di coltura cellulare, lavate due volte con PBS, quindi è stata aggiunta la soluzione di fissaggio di colorazione da 1 ml β-galatosidasi e fissata a temperatura ambiente per 15 minuti.

b) La soluzione fissa è stata scartata e le cellule sono state lavate con PBS per 3 volte, 2 minuti ciascuna

c) PBS è stato risucchiato il più lontano possibile, 1 ml di soluzione di colorazione è stata aggiunta a ciascun pozzo, e incubato a 37 ℃ per 2h fino al pernottamento.Nota: non incubare in un incubatore di anidride carbonica 37 ℃. Durante la colorazione, lo sviluppo del colore dovrebbe essere osservato nel tempo. Se l'espressione di β-galattosidasi nel campione è alta, la colorazione può essere completata entro poche ore. Se l'espressione dell'enzima β-galattoside è bassa, il tempo di incubazione deve essere esteso in modo appropriato, durante il quale la piastra 6-Bene dovrebbe essere sigillato con involucro di plastica o parafilm per evitare l'evaporazione del liquido.

d) osservazione sotto il normale microscopio leggero. Se non è possibile osservare e contare in tempo, il fluido di funzionamento della colorazione può essere rimosso, le celle possono essere lavate con PBS, quindi può essere aggiunta e memorizzata con PBS 2ML per 1 settimana a 4 ℃. Oltre a rimuovere il fluido di colorazione, aggiungere la glicerina del 70% per coprire le celle e le celle possono essere memorizzate per un lungo periodo a 4 ℃. Se è una diapositiva cellulare, può essere disidratata da gradiente etanolo e quindi gocciolamento Tablet sigillato trasformato in una fetta permanente per la conservazione.

(2) per la sezione congelata

a) Le sezioni congelate sono state bilanciate a temperatura ambiente per 10min.circle il tessuto con un tratto di composizione.

b) Una quantità appropriata della soluzione di fissaggio della colorazione β-galattosidasi è stata aggiunta al tessuto per coprire completamente il tessuto e fissato a temperatura ambiente per 20 minuti.

c) Le sezioni del tessuto sono state immerse e lavate da PBS per 3 volte, 5min ciascuna.

d) La sezione è posizionata in una scatola bagnata a prova di luce e una quantità appropriata di soluzione di colorazione viene aggiunta al tessuto per coprire completamente il tessuto. La scatola bagnata è stata incubata a 37 ℃ e il rendering del colore è stato osservato sotto il microscopio ogni 2h. Se non è stata osservata alcuna resa cromatica, l'incubazione è continuata fino a quando le cellule senile hanno mostrato il colore sul tessuto. Se il campione deve essere incubato durante la notte, è necessario aggiungere un importo sufficiente della soluzione di tintura per evitare che il liquido sia evaporato.

e) Dopo aver sviluppato il colore del tessuto, la soluzione di colorazione è stata rimossa e le sezioni sono state immerse in PBS per due volte e imbevuto di acqua pura per due volte

f) Le gocce di tintura rossa solida nucleare sono state aggiunte per 3 minuti e lavato per 3 volte. Questo passaggio non è richiesto. Se il nucleo deve essere macchiato, possiamo usare la nostra tintura rossa fissativa nucleare (G1035).

g) disidratato con etanolo anidro per 2 volte, 5min ciascuno, xilene trasparente per 5min, e quindi rilasciare la gomma neutra per sigillare il pezzo.



Risultato della colorazione:

Le cellule senescenti sono blu.


Leggenda:

图片 1.

Fig.1 Le cellule Wi-38 sono state macchiate dal kit β-galattoside. La figura a sinistra mostra le celle wi-38 senescenti senza capacità di divisione e proliferazione ma ancora vive. Le celle di colorazione positive dopo la colorazione sono più del 95%. L'immagine a destra mostra le cellule Wi-38 di nuova rianimata con meno di 3 passaggi (passaggio anticipato) e nessuna cellule significativamente positive dopo la colorazione.



Appunti

1. La soluzione di fissaggio della colorazione β-galattosidasi è tossica e corrosiva, quindi si prega di prestare attenzione alla protezione durante il funzionamento.

2. La soluzione X-Gal deve essere scongelata completamente a temperatura ambiente e miscelata prima dell'uso. La soluzione di colorazione. BE-Galactosidase A e B deve essere ripristinata a temperatura ambiente prima dell'uso. La soluzione di funzionamento della tintura preparata deve essere completamente miscelata senza precipitazioni prima dell'uso.

3. La reazione di colorazione β-galattosidasi delle cellule senescenti dipende dalle condizioni specifiche del pH e non possono essere eseguite in un incubatore di CO2

La reazione di colorazione della β-galattosidasi delle cellule senescenti dipende da condizioni di pH specifiche e non possono essere eseguite in un incubatore di CO2 incubate per sviluppare il colore, altrimenti influenzerà il pH del fluido di lavoro di tintura, con conseguente tintura di guasto.

4. Scegli materiali di consumo di polipropilene o vetro quando preparano la soluzione di tintura

5. Tempo di sviluppo del colore 2H- Overnight, durante il quale dovrebbe essere osservato lo sviluppo del colore diverse volte, è troppo breve tempo può portare a risultati negativi; troppo a lungo può portare a falsi positivi. Il tempo di sviluppo del colore è strettamente correlato alla quantità di β- Galactosidasi contenuto nell'esempio stesso.

6. La colorazione β-galattosidasi delle sezioni dei tessuti richiede una maggiore preparazione dei campioni. I campioni dovrebbero essere conservati a -80 ℃ e l'esperimento dovrebbe essere completato in breve tempo il prima possibile. Perché β-galatosidasi è molto facile da disattivare, l'immagazzinamento improprio del campione o troppo tempo può portare a inattivazione dell'enzima , la colorazione non è positiva.

7. Prima di preparare la soluzione di tintura, il valore del pH della soluzione di tintura A dovrebbe essere controllato. Se non è 6.0 (il PH può cambiare a causa delle condizioni di conservazione), HCL o NaOH devono essere utilizzati per regolare il pH a 6.0 prima dell'uso.


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Tutti i nostri prodotti saranno imballati in cartone standard.

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