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Kit Synthesis SWScript RT II Fitto CDNA (con rimozione di GDNA)

  • G3333-50.

Descrizione del prodotto

Introduzione al prodotto:

Questo prodotto utilizza la trascrittasi inversa mutante modificata per sintetizzare il primo filo di cDNA con RNA o mRNA totale come modello per una trascrizione inversa efficiente. Il kit contiene tutti i reagenti necessari per sintetizzare il primo filo di cDNA con alta qualità, e fornisce due tipi di primer di sintesi di CDNA per la scelta: il primer ad esaxer casuale e OLIGO (DT) 18 Primer sintetizzato Prodotti cDNA sintetizzati sintetizzati che possono essere direttamente utilizzato per le successive reazioni PCR o QPCR. SWESCRIPSCR RT II (TranscriptSeseseSex) è una trascrittasi inversa mutante in base alla trascrittasi inverso M-MLV e ottenuta tramite lo screening evolutivo in vitro. SWESCRICT RT II non ha attività rnase h. Il degrado dell'RNA nel modello dell'ibridazione del DNA / RNA durante la prima reazione di sintesi del cDNA del primo filo è stato evitato, in modo da garantire la quantità e la lunghezza della prima sintesi del cDNA del filo. Rispetto all'enzima di tipo selvaggio e alla prima generazione di SWESCRICT RT I, la seconda generazione di SWESCRICT RT II ha ulteriormente migliorato la stabilità termica e l'efficienza della sintesi della CDNA. Può sintetizzare in modo efficiente il cDNA nell'intervallo di 42-65 ℃ e completare la reazione inverso della trascrizione non appena 5 minuti, particolarmente adatto per la trascrizione inversa dell'RNA con struttura complessa.

Il kit fornisce anche il reagente di rimozione del GDNA, che può rimuovere rapidamente la contaminazione del DNA genomica residua dai modelli di RNA prima delle fasi di trascrizione inversa, migliorando l'affidabilità dei risultati sperimentali e semplificando la progettazione dei primer di QPCR senza la necessità di progettazione del primer cross-exon.

Contenuto del pacco:

Gatto. No.

Descrizione del prodotto

Volume

G3333.

Kit Synthesis SWScript RT II Fitto CDNA (con rimozione di GDNA)

50RXNS / 100RXNS.

Componenti:

Numero di componenti

Componente

G3333-50.

G3333-100.

G3333-1.

Mix enzimatico SWESCRICT RT IIa

50L

100UL

G3333-2.

5x buffer di reazioneb

200L.

400UL

G3333-3.

OLIGO (DT) 18 Primer (100UM)

50L

100UL

G3333-4.

Primer esassori casuale (100um)

50L

100UL

G3333-5.

GDNA Remover.

50L

100UL

G3333-6.

Tampone di rimozione del 10x GDNA

50L

100UL

G3333-7.

Acqua senza nucleasi

1 ml.

1 ml.

Manuale

1 pc

1 pc

a: Con inibitore rnase

b: Con miscela DNTP e mg² +

Condizioni di conservazione:

Trasporto della borsa di ghiaccio bagnata; Immagazzinato a -20 ℃ temperatura, valido per 12 mesi.

Utilizzo:

1. Rimozione del genoma

(1) Il modello di RNA e l'acqua senza nucleasi sono stati messi il ghiaccio per sciogliersi per un uso successivo;

(2) Reazione di rimozione del genoma (sistema di reazione 10L consigliata):

Componente

Volume

Tampone di rimozione del 10x GDNA

1ul

GDNA Remover.

1UL.

RNA / mRNA totale

0,1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug

Acqua senza nucleasi

Aggiungi a 10UL.

(3) mescolare delicatamente e centrifugare;

(4) incubare a 37 ℃ per 2 minuti e quindi mettere il ghiaccio per un uso successivo;

2. Sintesi del primo cDNA del First Strand

(1) Preparazione del sistema di reazione in trascrizione inversa (si consiglia il sistema di reazione del 20L);

Componente

Volume

Nel passaggio precedente, il genoma ha rimosso il fluido di reazione

10ul

5x buffer di reazione

4L.

OLIGO (DT) 18 Primer (100UM)

1UL.

o primer esassori casuali (100um)

o 1ul

o primer specifico del gene (2um)

o 1ul

Mix enzimatico SWESCRICT RT II

1UL.

Acqua senza nucleasi

Aggiungi a 20UL.

Nota: per il GC elevato o i modelli complessi, il modello RNA, i primer di trascrizione inversa e l'acqua senza nucrenasi possono essere mescolati in anticipo e quindi raffreddati su ghiaccio rapidamente dopo essere tenuto a 65 ℃ per 5 minuti. E poi aggiungi gli altri componenti.

(2) mescolare delicatamente e centrifugare;

(3) Impostazione del programma di trascrizione inversa:

Temperatura

Time

25 ℃ A.

5 minuti

55 ℃ B.

5-15 min.

85 ℃.

5 S.

A: Ad esempio, il primer ad esaxer casuale è selezionato e incubato a 25 ℃ per 5 minuti, la reazione successiva viene eseguita. Se si sceglie di utilizzare OLIGO (DT) 18 Primer o Gene Specifico PRIMER, è possibile reagire direttamente a 55 ℃.

B: per elevati modelli GC o complessi, la temperatura della trascrizione inversa può essere sollevata a 65 ℃.

Appunti:

1. Si prega di indossare guanti monouso durante il funzionamento per evitare la contaminazione rnase.

2. I prodotti a trascrizione inversa possono essere memorizzati a -20 ℃ per un breve periodo. Se è necessario lo stoccaggio a lungo termine, si consiglia di memorizzarli a -80 ℃ dopo il confezionamento per evitare cicli di congelamento ripetuti.

3. Se il modello è di origine eucarinotica, si consiglia di selezionare Oligo (DT) 18 Primer e accoppiarlo con il Poly di 3 'una coda di mRNA eucariotica per ottenere la resa più alta del cDNA a figura intera.

4. Per la trascrizione inversa del RNA procariotico, dovrebbe essere utilizzato il primer ad esaxer casuale o il primer specifico del gene.

5. Il primer esassori casuale ha un'ampia applicabilità ed è adatto per mRNA, RRNA, TRNA, piccoli modelli RNA e LNCRNA.

6. Se la trascrizione inverso è seguita da QPCR ASTAY, PRIMER OLIGO (DT) 18 PRIMER e RANOMAND HEXAMER PRIMER può essere miscelato per rendere l'efficienza della sintesi di CDNA in tutte le regioni dell'mRNA lo stesso, che aiuta a migliorare l'autenticità e la ripetibilità dei risultati quantitativi.

7. Se i successivi primer QPCR sono progettati attraverso gli esoni, il passaggio di rimozione del genoma può essere omesso.

G3333-50A.downloadimimg.Fetta 11.Fetta 12.Fetta 13.Fetta 10.


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