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Fitc-tiramide per il segnale di tiramide Amplificazione di immunofluorescenza reagente

Volume: 50ul.
  • G1222-50L.
  • Servicebio

Descrizione del prodotto

Fitc-tiramide.

Cat No. G1222-50LUL.

Introduzione al prodotto:

Questo prodotto FITC-Tyramide, Tyramide con etichetta FITC, viene utilizzato per la tecnologia di amplificazione del segnale tiramide (TSA, amplificazione del segnale di tiramide), in appresso denominata tecnologia TSA. Il principio principale della tecnologia TSA è quello di utilizzare la reazione di perossidasi della tiramide (cioè, il sale di tiramide etichettato fluorescente costituisce un sito legante covalente in HRP catalizzato da H2O2) per produrre un gran numero di reazioni enzimatiche. Questo prodotto può interagire con i residui di proteine ​​circostanti (incluso il triptofano, l'istidina e i residui della tirosina) si combinano per formare una grande quantità di deposizione di fluorescein nel sito di rilegatura antigene anticorpale per raggiungere l'amplificazione del segnale. È inoltre possibile utilizzare diverse tiramine fluorescenti per ottenere più colorazione fluorescente ripetendo più volte immunolabeling.

I dati dello spettro di fluorescenza dei prodotti della serie sono i seguenti:

Oggetto numero.

Nome del prodotto

Specifiche

EX / EM.

G1222-50μl.

Fitc-tiramide.

50 μl.

492/518.

G1223-50μl.

CY3-Tyramide.

50 μl.

555/569.

G1231-50μl.

IF488-Tyramide.

50 μl.

491/516.

G1233-50μl.

IF555-Tyramide.

50 μl.

557/570.

G1232-50μl.

IF647-Tyramide.

50 μl.

656/670.

Contenuto del pacco:

Numero articolo del prodotto

nome del prodotto

Specifiche

Fitc-tiramide.

G1222-50μl.

50μl.

Condizioni di archiviazione:

I pacchetti di ghiaccio trasportati, negozio a -20 ° C, periodo valido è di 6 mesi.

Istruzioni

Prendendo fette di tessuto come esempio, l'acqua nei seguenti passaggi sperimentali è l'acqua pura e i reagenti coinvolti si riferiscono a Prodotti correlati a ServiceBio:

1. Deparaffinizzare le sezioni del tessuto in acqua;

2. Recupero dell'antigene: in base all'anticorpo primario utilizzato e al tipo di campione, utilizzare un metodo appropriato per eseguire il recupero dell'antigene sulla sezione del tessuto. 1 × PBS (G4202 o G0002 è raccomandato) Lavare 3 volte, 5 minuti ogni volta;

3. Utilizzare una penna PAP per cerchiare e segnare il tessuto;

4. (Facoltativo) Aggiungi Tissue Autofluorescence Quencher (soluzione G1221A consigliata) al tessuto, incubare a temperatura ambiente per 30 minuti e lavare per 5 minuti;

5. Attivazione della perossidasi endogena: aggiungere il 3% H2O2 alla sezione per coprire il tessuto e incubare al buio a temperatura ambiente per 25 minuti, per bloccare la perossidasi endogena per ridurre la colorazione di sfondo non specifica. Lavare 3 volte con 1 × PBS, 5 minuti ogni volta;

6. Blocco: dopo che le diapositive sono leggermente essiccate, il 3% BSA o il siero viene aggiunto a goccia a castonatura per sigillare per 30 minuti. Se l'anticorpo primario è di origine di capra, blocca con il 10% di siero di asino e blocco con il 3% di BSA per altre fonti;

7. Incubare l'anticorpo primario: diluire l'anticorpo primario a una concentrazione appropriata con 1 × PBS o una soluzione di blocco (G2010 si consiglia). Scuotere delicatamente la soluzione di blocco sulla sezione, aggiungere l'anticorpo primario diluito a goccia a goccia per coprire il tessuto e posizionare la sezione piatta in una scatola di camera umida con acqua e incubare durante la notte a 4 ° C. Lavare 3 volte con 1 × PBS, 5 minuti ogni volta;

8. Incubare l'anticorpo secondario etichettato da HRP: diluire l'anticorpo secondario a una concentrazione appropriata con 1 × PBS o una soluzione di blocco (consigliata G2010), aggiungere l'anticorpo secondario a goccia al tessuto e incubare a temperatura ambiente per 50 minuti. Lavare 3 volte con 1 × PBS, 5 minuti ogni volta;

9. Diluire FITC-TYRAMUSE 1: 500 con TBST (aggiungere H2O2 alla concentrazione finale di 0,03 ‰, w / v prima dell'uso) per preparare la soluzione di lavorazione della colorazione TSA. Aggiungere 100 μl di soluzione di lavoro di colorazione a ciascun campione e incubare per 10 minuti a temperatura ambiente al buio. Lavare con 1 × PBS 3 volte, 5 minuti ogni volta; (Nota: si consiglia di preparare la soluzione di lavorazione della colorazione TSA per l'uso corrente e deve essere memorizzata a 4 ° C e protetto dalla luce. È efficace entro 24 ore)

10. Trattamento a microonde: la sezione del tessuto è posizionata in una scatola di riparazione piena di soluzione di recupero dell'antigene (scegliere la soluzione di recupero antigene appropriata in base al tipo di tessuto e anticorpo) per il trattamento del riscaldamento a microonde per rimuovere gli anticorpi primari e secondari rilegati. In questo passaggio, è necessario prevenire i fiocchi secchi causati da eccessiva evaporazione liquida.

(Nota: se è necessario eseguire una colorazione fluorescente a doppia o multipla, procedere in base a questo passaggio. Se non è necessario eseguire la colorazione fluorescente doppia o multipla, saltare questo passaggio e procedere al punto 12)

11. Ripetere i passaggi 7-10, incubare il secondo anticorpo primario, anticorpo secondario e etichetta TSA e il trattamento a microonde per rimuovere l'anticorpo primario e l'anticorpo secondario.

12. Continuazione del nucleo con DAPI: dopo leggermente essiccate le sezioni, aggiungere la soluzione di colorazione DAPI (consigliata G1012) al tessuto e incubare per 10 minuti a temperatura ambiente al buio. Lavare 3 volte con 1 × PBS, 5min ogni volta.

13. (Facoltativo) Tessuto Autofluorescenza Tessuto: Aggiunta Autofluorescence Thorning (G1221B Soluzione consigliata) a goccia al tessuto, incubare a temperatura ambiente per 5 minuti e risciacquare con acqua corrente per 3 minuti.

14. Montaggio e esame microscopico: dopo leggermente essiccate le sezioni, aggiungere le compresse di montaggio a discesa anti-fluorescenza (G1401 è raccomandato). Selezionare il canale di fluorescenza appropriato per osservare e raccogliere immagini. Le fette possono essere conservate per 15 giorni a 4 ° C in una casella di scorrimento a prova di luce.

Precauzioni

1. Dopo che il prodotto si è sciolto a temperatura ambiente, utilizzare una centrifuga per una corta centrifugazione e utilizzare un consiglio di aspirazione pulito dopo aver soffiato e mescolare.

2. Rispetto all'anticorpo secondario fluorescente, il kit TSA ha una maggiore sensibilità e un segnale più forte. Pertanto, la concentrazione dell'anticorpo primario deve essere ridotta, generalmente da 5-10 volte sulla base del rapporto di diluizione consigliato nel manuale anticorpale, per ridurre la fluorescenza di sfondo causata da un legame non specifico. Si consiglia di impostare la concentrazione del gradiente dell'anticorpo primario per ottenere l'effetto migliore.

3. Se la fluorescenza di sfondo è forte, si consiglia di aggiungere il fase di estinguere automatico dell'autofluorescenza del tessuto.

4. Il rapporto di diluizione raccomandato della tiramide fluorescente è 1: 500 e il rapporto di diluizione può essere regolato in base ai risultati sperimentali (la gamma Raccordo di diluizione raccomandata è 1: 200-1: 1000).

5. Per la migliore etichettatura fluorescente, si consiglia di incubare prima l'anticorpo policlonale, quindi incubare l'anticorpo monoclonale; Incubare l'anticorpo corrispondente alla proteina target a bassa abbondanza, quindi incubare l'anticorpo corrispondente alla proteina target ad alta abbondanza.

6. Si prega di indossare il camice da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

G1222-50ULA.Reagente -1 (1)downloadimimg.Fetta 13.Fetta 12.Fetta 10.

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