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DNA Ligase 2 X Miscelazione universale per la legatura universale con T4 DNA Ligase e tampone Biologia molecolare Reagente

Specifica: 100t.
  • G3341-100.
  • Servicebio
  • Servicebio.

Descrizione del prodotto

G3341-100.

Descrizione:

2 × Mix di lagamento universale universale è un premiscelatore da 2 × prêt-à-utilizzo contenente tampone T4 DNA Ligase e reazione. La T4 DNA Ligase contenuta può catalizzare il 5'-P e 3'eds di estremità appiccicose o DNA o RNA a doppio filamento con forza. Le estremità -OH sono combinate con i legami del fosfoodiestere. E può riparare Nicks Single-Stranded in catene DNA, RNA e DNA / RNA a doppia fila. Il buffer di reazione premiscelato ottimizzato rende la reazione più efficiente e conveniente da gestire. Il sistema di reazione può trasformare una varietà di cellule chimicamente competenti dopo aver reagito a 25 ° C per 5 minuti.

Stoccaggio e trasporto

Trasporto con ghiaccio bagnato; Stoccaggio a -20 ° C, valido per 12 mesi.

Componente

G3341-50.

G3341-100.

2 × Mix di legatura universale

250 μl.

2 × 250 μl

Sistema di connessione (sistema di reazione 10 μl consigliata)

Componente

Volume

2 × Mix di legatura universale

5 μl.

Vettore

X μl.

Segmento del DNA.

Y μl.

Acqua senza nucleasi

Aggiungere a 10 μl

Condizioni di reazione legale

La reazione di legatura dell'estremità appiccicosa a 25 ° C è di 5-30 minuti, e la reazione di legatura della fine smussata a 25 ° C non supera le 2 ore o la reazione a 4 ° C durante la notte.

Conversione di prodotti di legazione

1. Rimuovere le cellule competenti (come E.Coli DH5α, E.Coli TOP10, ecc.) Dal frigorifero a -80 ° C e disgustarli sul ghiaccio;

2. Aggiungere il campione reagito allo stato competente, muovere delicatamente il fondo del tubo con le dita per mescolare bene, e il bagno di ghiaccio per 30 minuti;

3. Il prodotto viene quindi posizionato in un bagno di acqua a 42 ° C per 90 s per riscaldare lo shock, e successivamente, è posizionato rapidamente sul ghiaccio per 2-5 minuti;

4. Prendere 900 μl di SOC o LB sterile e aggiungerlo al tubo EP. Dopo la miscelazione, posizionare il tubo EP su uno shaker e incubarsi a 220 giri / min a 37 ° C per 1 ora per recuperare i batteri (può anche essere collocato in un incubatore di 37 ° C per la cultura del luogo statico per 1 ora);

5. Secondo i requisiti sperimentali, attirare diversi volumi di cellule competenti trasformate e aggiungerle al terreno solido LB contenente i corrispondenti antibiotici, diffondere le cellule uniformemente, e dopo il liquido è completamente assorbito, posizionare la piastra capovolta in un 37 ° C Incubatore e coltivare durante la notte.

Identificazione di cloni positivi

Le colonie monoclonali coltivate sul piatto vengono raccolte per l'identificazione del PCR della colonia, o dopo la coltura, il plasmide viene estratto dalla digestione della restrizione o dall'identificazione PCR, o il plasmide estratto è direttamente sequenziato e analizzato per l'identificazione.

Precauzioni

1. Si consiglia di configurare il sistema di reazione sul ghiaccio.

2. I frammenti vettoriali e target devono essere purificati e elettroforesi gel per rilevare la loro qualità e concentrazione. Quando la concentrazione è bassa, puoi usarle direttamente per il trucco senza aggiungere acqua. Quando il volume totale del vettore e dell'inserto è maggiore di 5 μl, il sistema di reazione può essere amplificato a 20 μl.

3. Si raccomanda che il rapporto molare del vettore da inserire sia 1: 3 ~ 1: 10.

4. Quando l'elettroporazione viene utilizzata per la trasformazione, il prodotto di organizzazione deve essere purificato per metodo di colonna o metodo di precipitazione etanolo.

5. 2 × Si consiglia di stirare la miscelazione universale universale da stirare se utilizzato, e immediatamente restituito a -20 ° C dopo l'uso. Dopo lo scongelamento, può essere imballato e congelato per ridurre il numero di cicli di congelamento ripetuto.

6. Quando si collega un vettore Blunt-Ended a un frammento di DNA, il vettore deve essere defosforilato (consigliato G3400) per prevenire la sua auto-circolazione.

7. Si prega di indossare abiti da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

G3341-100.downloadimimg.Fetta 10.Fetta 12.Fetta 13.

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